Um mundo uma luta
─ Cooperação internacional para construir uma comunidade global de destino comum que responde ao desafio da covid-19 pandemia
O romance Coronavírus que varreu o mundo resultou em uma crise pandêmica global de Covid-19 em andamento. O romance Coronavírus não tem fronteiras, nenhum país será poupado desta batalha contra o Covid-19. Em resposta a esta pandemia mundial da Covid-19, a Liming Bio-Products Corp está fazendo contribuições para apoiar o bem-estar de nossas comunidades globais.
Nosso mundo está atualmente confrontado com o impacto sem precedentes da nova doença do Coronavírus 2019 (CoVID-19). Até o momento, não há medicamento eficiente disponível para o tratamento desta doença. No entanto, muitos testes de diagnóstico foram desenvolvidos para a detecção de Covid-19. Esses testes são baseados em métodos moleculares ou sorológicos para detectar os novos biomarcadores nucleicos ou anticorpos nucleicos ou anticorpos específicos do coronavírus. À medida que o Covid-19 atingiu um status de pandêmica, o diagnóstico precoce da nova infecção pelo coronavírus é fundamental para avaliar a propagação do vírus e contê-lo, mas ainda não existe um teste perfeito para uso universal. Temos que saber quais testes podem ser potencialmente usados para triagem, diagnóstico e monitoramento da infecção COVID-19 e quais são suas limitações. É muito importante como fazer melhor uso dessas ferramentas científicas e ajudar a identificar e controlar o surgimento dessa doença rápida e grave.
O objetivo da detecção do novo coronavírus é determinar se um indivíduo que tem infecção por Covid-19 ou um portador assintótico que pode espalhar o vírus silenciosamente, para fornecer informações essenciais para orientar a tomada de decisão para o tratamento clínico. Estudos anteriores mostraram que 70% das decisões clínicas dependem dos resultados dos testes. Quando diferentes métodos de detecção são usados, os requisitos dos kits de reagentes de detecção também são diferentes.
Figura 1
Figura 1:Diagrama mostrando os estágios-chave dos níveis gerais de biomarcadores durante o curso típico do tempo da infecção por Covid-19. O eixo x indica o número de dias de infecção, e o eixo y indica a carga viral, a concentração de antígenos e a concentração de anticorpos em diferentes períodos. Anticorpo refere -se a anticorpos IgM e IgG. A detecção de RT-PCR e antígeno são usados para detectar a presença ou ausência de novo coronavírus, que é evidência direta para a detecção precoce de pacientes. Uma semana após a infecção viral, a detecção de PCR ou a detecção de antígeno é preferida. Após a nova infecção pelo coronavírus por cerca de 7 dias, o anticorpo IgM contra o novo coronavírus aumentou gradualmente no sangue do paciente, mas a duração da existência é curta e sua concentração diminui rapidamente. Por outro lado, o anticorpo IgG contra o vírus aparece mais tarde, geralmente cerca de 14 dias após a infecção pelo vírus. A concentração de IgG aumenta gradualmente e persiste um longo período no sangue. Assim, se o IgM for detectado no sangue do paciente, significa que o vírus infectou recentemente, que é um marcador de infecção precoce. Quando o anticorpo IgG é detectado no sangue do paciente, significa que a infecção viral já ocorre há algum tempo. Também é chamado de infecção tardia ou infecção anterior. É frequentemente visto em pacientes que estão na fase de recuperação.
Os biomarcadores de romance coronavírus
O novo coronavírus é um vírus de RNA, composto por proteínas e ácidos nucleicos. O vírus invade o corpo do hospedeiro (humano), entra nas células através do local de ligação correspondente do receptor ACE2 e se replica nas células hospedeiras, fazendo com que o sistema imunológico humano responda a invasores estrangeiros e produza anticorpos específicos. Portanto, os ácidos nucleicos e antígenos do frasco e anticorpos específicos contra novos coronavírus podem teoricamente ser usados como biomarcadores específicos para a detecção do novo coronavírus. Para a detecção de ácido nucleico, a tecnologia RT-PCR é a mais comumente usada, enquanto os métodos sorológicos são comumente usados para a detecção dos novos anticorpos específicos para coronavírus. Atualmente, existem uma variedade de métodos de teste disponíveis que podemos escolher para testar a infecção por Covid-19 [1].
Princípios básicos dos principais métodos de teste para romance Coronavírus
Muitos testes de diagnóstico para CoVID_19 estão disponíveis até agora, com mais kits de teste recebendo aprovação sob uma autorização de uso de emergência todos os dias. Embora os novos desenvolvimentos de teste lançados com tantos nomes e formatos diferentes, todos os testes atuais de Covid_19 dependem basicamente de duas principais tecnologias: detecção de ácido nucleico para o RNA viral e imunoensaios sorológicos que detectam anticorpos específicos virais (IGM e IgG).
01. Detecção de ácido nucleico
A reação em cadeia da polimerase de transcrição reversa (RT-PCR), a amplificação isotérmica mediada por loop (LAMP) e o sequenciamento de próxima geração (NGS) são os métodos de ácido nucleico comum para a detecção de novo RNA coronavírus. A RT-PCR é o primeiro tipo de teste para o Covid-19, recomendado pela Organização Mundial da Saúde (OMS) e pelo Centro de Controle e Prevenção de Doenças (CDC) dos EUA.
02. Detecção de anticorpos serológicos
O anticorpo é uma proteína protetora produzida no corpo humano em resposta à infecção pelo vírus. O IgM é um tipo precoce de anticorpo, enquanto a IgG é um anticorpo do tipo posterior. A amostra sérica ou plasmática é geralmente examinada quanto à presença de tipos específicos de IgM e IgG do anticorpo para avaliação de fases agudas e convalescentes da infecção por Covid-19. Esses métodos de detecção baseados em anticorpos incluem o ensaio de imunocromatografia de ouro coloidal, imunocromatografia por látex ou microesfera fluorescente, ensaio imunossorvente ligado à enzima (ELISA) e ensaio de quimioluminescência.
03. Detecção Viral de Antígeno
O antígeno é uma estrutura no vírus reconhecido pelo corpo humano que desencadeia o sistema de defesa imunológico a produzir anticorpos para limpar o vírus do sangue e dos tecidos. Um antígeno viral presente no vírus pode ser direcionado e detectado usando o imunoensaio. Como o RNA viral, os antígenos virais também estão presentes no trato respiratório de indivíduos infectados e podem ser usados para diagnosticar a fase aguda da infecção por Covid-19. Portanto, é frequentemente recomendado coletar amostras respiratórias superiores, como saliva, swabs nasofaríngeos e orofaríngeos, escarra de tosse profunda, líquido de lavagem broncoalveolar (BALF) para teste de antígeno inicial.
Seleção de métodos de teste para novos coronavírus
A seleção de um método de teste envolve muitos fatores, incluindo definição clínica, controle de qualidade de teste, tempo de resposta, custos de teste, métodos de coleta de amostragem, requisitos técnicos de pessoal de laboratório, requisitos de instalações e equipamentos. A detecção de ácidos nucleicos ou antígenos virais é fornecer evidências diretas da presença dos vírus e confirmar o diagnóstico de nova infecção por coronavírus. Embora existam muitos métodos para detecção de antígeno, sua sensibilidade à detecção do novo coronavírus é teoricamente menor que a da amplificação de RT-PCR. O teste de anticorpos é a detecção de anticorpos antivírus produzidos no corpo humano, que está atrasado no tempo e geralmente não pode ser usado para detecção precoce durante a fase aguda da infecção por vírus. O cenário clínico para aplicações de detecção pode variar, e os locais de coleta de amostras também podem ser diferentes. Para a detecção de ácidos nucleicos virais e antígenos, a amostra precisa ser coletada no trato respiratório onde o vírus está presente, como swabs nasofaríngeos, swabs orofaríngeos, escarro ou líquido de lavagem broncoalveolar (BALF). Para detecção baseada em anticorpos, a amostra de sangue precisa ser coletada e examinada para a presença de anticorpo antivírus específico (IGM/IgG). No entanto, os resultados dos testes de anticorpo e ácido nucleico podem se complementar. Por exemplo, quando o resultado do teste é o ácido nucleico negativo, o IgM negativo, mas o IgG positivo, esses resultados indicam que o paciente atualmente não carrega o vírus, mas foi recuperado da nova infecção pelo coronavírus. [2]
Vantagens e desvantagens de novos testes de coronavírus
No protocolo de diagnóstico e tratamento para a nova pneumonia do coronavírus (versão do estudo7) (liberada pela Comissão Nacional de Saúde e Administração do Estado da Medicina Tradicional Chinesa em 3 de março de 2020), o teste de ácido nucleico é usado como método padrão -ouro para o diagnóstico do romance A infecção por coronavírus, enquanto o teste de anticorpos também é considerado um dos métodos de confirmação para o diagnóstico.
Achados patogênicos e sorológicos
(1) Achados patogênicos: o novo ácido nucleico do coronavírus pode ser detectado em swabs nasofaríngeos, escarro, secreções do trato respiratório inferior, sangue, fezes e outras amostras usando métodos RT-PCRAND/ou NGS. É mais preciso se as amostras forem obtidas do trato respiratório inferior (escarro ou extração do trato de ar). Os espécimes devem ser enviados para teste o mais rápido possível após a coleta.
(2) achados sorológicos: O IgM específico do vírus NCP se torna detectável cerca de 3-5 dias após o início; A IgG atinge uma titulação de pelo menos um aumento de 4 vezes durante a convalescença em comparação com a fase aguda.
No entanto, a seleção de métodos de teste depende de locais geográficos, regulamentos médicos e ambientes clínicos. Nos EUA, o NIH emitiu Diretrizes de tratamento do Coronavirus 2019 (COVID-19) (Site Atualizado: 21 de abril de 2012) e Política emitida pela FDA para testes de diagnóstico para doença de Coronavirus-2019 durante a emergência de saúde pública (emitido em 16 de março ), em que testes sorológicos dos anticorpos IgM/IgG selecionados apenas como teste de triagem.
Método de detecção de ácido nucleico
RT_PCR é um teste de ácido nucleico altamente sensível, projetado para detectar se o novo RNA de coronavírus está ou não presente na amostra respiratória ou outra. Um resultado positivo no teste de PCR significa a presença de um novo RNA de coronavírus na amostra para confirmar a infecção por Covid-19. Um resultado negativo no teste de PCR não significa a ausência da infecção pelo vírus, pois pode ser afetada pela baixa qualidade da amostra ou ponto no tempo da doença na fase recuperada, etc. Embora o RT-PCR seja um teste altamente sensível, ele possui várias desvantagens. Os testes de RT-PCR podem ser trabalhosos e consumidos por muito trabalho, crucialmente dependentes da alta qualidade da amostra. Isso pode ser um desafio, porque a quantidade de RNA viral não apenas varia tremendamente entre pacientes diferentes, mas também pode variar dentro do mesmo paciente, dependendo dos pontos de tempo em que a amostra é coletada, bem como as fases de infecção ou o início dos sintomas clínicos. Detectar o novo coronavírus requer amostras de alta qualidade que contêm uma quantidade suficiente de RNA viral intacto.
O teste de RT-PCR pode fornecer um resultado negativo incorreto (falso negativo) para alguns pacientes que têm infecção por covid-19. Como sabemos, os principais locais de infecção do novo coronavírus estão localizados no pulmão e no trato respiratório inferior, como alvéolos e brônquios. Portanto, a amostra de escarro de uma tosse profunda ou do fluido de lavagem broncoalveolar (BALF) considerou ter a maior sensibilidade para a detecção viral. No entanto, na prática clínica, as amostras são frequentemente coletadas do trato respiratório superior usando swabs nasofaríngeos ou orofaríngeos. A coleta dessas amostras não é apenas desconfortável para os pacientes, mas também requer pessoal especialmente treinado. Para tornar a amostragem menos invasiva ou mais fácil, em alguns casos, os pacientes podem receber um swab oral e permitir que eles coloquem uma amostra da mucosa bucal ou da língua se enrolando. Sem RNA viral suficiente, a RT-qPCR pode retornar um resultado de teste falso-negativo. Na província de Hubei, China, a sensibilidade à RT-PCR na detecção inicial foi relatada apenas cerca de 30%a 50%, com uma média de 40%. A alta taxa de falso-negativo foi provavelmente causada por amostragem insuficiente.
Além disso, o teste de RT-PCR requer pessoal altamente treinado para executar etapas complexas de extração de RNA e procedimento de amplificação por PCR. Também requer um nível mais alto de proteção de biossegurança, instalação de laboratório especial e instrumento de PCR em tempo real. Na China, o teste de RT-PCR para detecção de Covid-19 precisa ser realizado em laboratórios de biossegurança de nível 2 (BSL-2), com proteção de pessoal usando a prática de biossegurança de nível 3 (BSL-3). Sob esses requisitos, desde o início de janeiro até o início de fevereiro de 2020, a capacidade do laboratório do CDC da China Wuhan só conseguiu detectar algumas centenas de casos por dia. Normalmente, isso não seria um problema ao testar outras doenças infecciosas. No entanto, ao lidar com uma pandemia global como o Covid-19, com potencialmente milhões de pessoas a serem testadas, a RT-PCR se torna uma questão crítica devido aos seus requisitos para instalações de laboratório especiais ou equipamentos técnicos. Essas desvantagens podem limitar o RT-PCR a ser usado como uma ferramenta eficiente para a triagem e também pode levar a atrasos nos relatórios dos resultados dos testes.
Método de detecção de anticorpos sorológicos
Com o progresso do curso da doença, especialmente nos estágios médio e tardio, a taxa de detecção de anticorpos é muito alta. Um estudo no Hospital Sul Central de Wuhan mostrou que a taxa de detecção de anticorpos poderia atingir mais de 90% na terceira semana de infecção por Covid-19. Além disso, o anticorpo é o produto da resposta imune humana contra o novo coronavírus. O teste de anticorpos oferece várias vantagens sobre o RT-PCR. Em primeiro lugar, o anticorpo sorológico testa simples e rápido. Os testes de fluxo lateral de anticorpos podem ser usados para o ponto de atendimento para proporcionar um resultado em 15 minutos. Em segundo lugar, o alvo detectado pelo teste sorológico é o anticorpo, que é conhecido por ser muito mais estável que o RNA viral. Durante a coleta, transporte, armazenamento e teste, as amostras para testes de anticorpos geralmente são mais estáveis que as amostras para RT-PCR. Em terceiro lugar, como o anticorpo é distribuído uniformemente na circulação sanguínea, há menos variação de amostragem em comparação com o teste de ácido nucleico. O volume da amostra necessário para o teste de anticorpos é relativamente pequeno. Por exemplo, 10 microlitro de sangue da pralha de dedos são suficientes para uso no teste de fluxo lateral de anticorpos.
Em geral, o teste de anticorpos é escolhido como uma ferramenta de suplemento para detecção de ácido nucleico para melhorar a taxa de detecção do novo coronavírus durante os cursos da doença. Quando o teste de anticorpos é usado junto com um teste de ácido nucleico, pode aumentar a precisão do ensaio para o diagnóstico de covid19, reduzindo potenciais resultados falsos positivos e falsos negativos. O guia de operação atual não recomenda o uso de dois tipos de teste separadamente como formato de detecção independente, mas deve ser usado como um formato combinado. [2]
Figura 2:A interpretação correta dos resultados dos testes de ácido nucleico e anticorpos para a detecção de nova infecção pelo coronavírus
Figura 3:Liming Bio-Products Co., Ltd.-Novo Kit de Teste Rapid Dual Rapid (Strongstep®SARS-CoV-2 IgM/IgG Teste Rapid, imunocromatografia por látex)
Figura 4:Liming Bio-Products Co., Ltd.-Strongstep®Novo kit de PCR em tempo real de coronavírus (SARS-CoV-2) (detecção para três genes, método da sonda fluorescente).
Observação:Este kit de PCR altamente sensível e pronto para uso está disponível em formato liofilizado (processo de liofilização) para armazenamento a longo prazo. O kit pode ser transportado e armazenado à temperatura ambiente e é estável por um ano. Cada tubo da Premix contém todos os reagentes necessários para a amplificação de PCR, incluindo transcriptase reversa, polimerase Taq, primers, sondas e substratos DNTPs. em um instrumento de PCR para executar a amplificação.
Em resposta ao novo surto de coronavírus, a Liming Bio-Products Co., Ltd. trabalhou rapidamente para desenvolver dois kits de diagnóstico para permitir que os laboratórios de saúde clínica e pública diagnostiquem rapidamente a infecção por Covid-19. Esses kits são muito adequados para uso para triagem em larga escala em países e regiões onde o novo surto de coronavírus está se espalhando rapidamente e para fornecer diagnóstico e confirmação para a infecção por Covid-19. Esses kits são para uso apenas sob autorização de uso de emergência pré-notificada (PEUA). Os testes são limitados a laboratórios certificados sob os regulamentos das autoridades nacionais ou locais.
Método de detecção de antígeno
1. A detecção viral de antígeno é classificada na mesma categoria de detecção direta que a detecção de ácido nucleico. Esses métodos de detecção direta procuram evidências de patógenos virais na amostra e podem ser usados para diagnóstico de confirmação. No entanto, o desenvolvimento de kits de detecção de antígenos requer alta qualidade de anticorpos monoclonais com forte afinidade e alta sensibilidade capaz de reconhecer e capturar vírus patogênicos. Geralmente, leva mais de seis meses para selecionar e otimizar um anticorpo monoclonal adequado para uso na preparação do kit de detecção de antígeno.
2. Atualmente, os reagentes para a detecção direta do novo coronavírus ainda estão em estágio de pesquisa e desenvolvimento. Portanto, nenhum kit de detecção de antígeno foi validado clinicamente e disponível comercialmente. Embora tenha sido relatado anteriormente que uma empresa de diagnóstico em Shenzhen desenvolveu um kit de detecção de antígeno e testada clinicamente na Espanha, a confiabilidade e a precisão do ensaio não puderam ser validadas devido à presença de problemas de qualidade de reagente. Até o momento, a NMPA (ex -China FDA) ainda não aprovou nenhum kit de detecção de antígeno para uso clínico ainda. Em conclusão, uma variedade de métodos de detecção foi desenvolvida. Cada método tem suas vantagens e limitações. Os resultados de diferentes métodos podem ser usados para verificação e complemento.
3. Produzir um kit de teste CoVID-19 de qualidade depende fortemente da otimização durante a pesquisa e o desenvolvimento. Liming Bio-Product Co., Ltd. Os kits de teste são necessários para atender aos padrões rigorosos de fabricação e controle de qualidade para garantir que eles forneçam os níveis mais altos de desempenho e consistência. Os cientistas da Liming Bio-Product Co., Ltd. têm mais de vinte anos de experiência em projetar, testar e otimizar kits de diagnóstico in vitro para garantir o mais alto nível de desempenho na quantificação analítica.
Durante a pandemia covid-19, o governo chinês enfrentou o aumento da enorme demanda por materiais de prevenção epidêmica nos pontos de acesso internacionais. Em 5 de abril, na conferência de imprensa do mecanismo de prevenção e controle conjunto do Conselho de Estado "fortalecendo o gerenciamento da qualidade dos materiais médicos e regulando a ordem do mercado", Jiang Fan, um inspetor de primeiro nível do Departamento de Comércio Exterior do Ministério do Commerce, disse: "Em seguida, focaremos nossos esforços em dois aspectos, primeiro, para acelerar o apoio de mais suprimentos médicos necessários para a comunidade internacional e também para melhorar o controle, a regulamentação e o gerenciamento dos produtos. Faremos a contribuição da China para responder em conjunto à epidemia global e construir uma comunidade com um futuro compartilhado para a humanidade.
Figura 5:Liming Bio-Products Co., Ltd. O romance Coronavirus Reagent obteve o Certificado de Registro da UE CE
O certificado honorário
HOUSHENSHAN
Figura 6. Liming Bio-Products Co., Ltd. Apoiou o Hospital da Montanha de Wuhan Vulcan (Houhenshan) para lutar contra a epidemia Covid-19 e recebeu o Certificado Honorário da Cruz Vermelha de Wuhan. O Hospital Wuhan Vulcan Mountain é o hospital mais famoso da China, especializado no tratamento de Covid grave - 19 pacientes.
À medida que o novo surto de coronavírus continua se espalhando pelo mundo, Nanjing Liming Bioproducts Co., Ltd. está intensificando para apoiar e ajudar as comunidades em todo o mundo com nossas tecnologias inovadoras para combater essa ameaça global sem precedentes. O teste rápido da infecção por Covid-19 é uma parte crítica de abordar essa ameaça. Continuamos contribuindo de maneira significativa, fornecendo plataformas de diagnóstico de alta qualidade nas mãos dos profissionais de saúde da linha de frente para que as pessoas possam receber os resultados críticos de testes de que precisam. Os esforços da Liming Bio-Products Co., Ltd. na batalha contra a pandemia da Covid-19 devem contribuir com nossas tecnologias, experiências e conhecimentos para as comunidades internacionais para a construção de uma comunidade global de destino.
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Hora de postagem: maio-01-2020
