Um mundo uma luta
─Cooperação internacional para construir uma comunidade global de destino comum respondendo ao desafio da pandemia de COVID-19
O novo coronavírus que varre o mundo resultou em uma crise global de pandemia COVID-19 em andamento.O novo coronavírus não tem fronteiras, nenhum país será poupado desta batalha contra o COVID-19.Em resposta a essa pandemia mundial do COVID-19, a Liming Bio-Products Corp está fazendo contribuições para apoiar o bem-estar de nossas comunidades globais.
Nosso mundo está atualmente enfrentando o impacto sem precedentes da nova pandemia da doença de coronavírus 2019 (COVID-19).Até o momento, não há nenhum medicamento eficiente disponível para o tratamento desta doença.No entanto, muitos testes de diagnóstico foram desenvolvidos para a detecção de COVID-19.Esses testes são baseados em métodos moleculares ou sorológicos para detectar o novo ácido nucleico específico do coronavírus ou biomarcadores de anticorpos.Como o COVID-19 atingiu um status de pandemia, o diagnóstico precoce da infecção pelo novo coronavírus é fundamental para avaliar a propagação do vírus e contê-lo, mas ainda não existe um teste perfeito para uso universal.Precisamos saber quais testes poderiam ser usados para triagem, diagnóstico e monitoramento da infecção por COVID-19 e quais são suas limitações.É muito importante como fazer melhor uso dessas ferramentas científicas e ajudar a identificar e controlar o surgimento dessa doença grave e de rápida disseminação.
O objetivo da detecção do novo coronavírus é determinar se um indivíduo que tem infecção por COVID-19 ou um portador assintótico que pode disseminar o vírus silenciosamente, para fornecer informações essenciais para orientar a tomada de decisão para o tratamento clínico.Estudos anteriores mostraram que 70% das decisões clínicas dependem dos resultados dos testes.Quando são usados métodos de detecção diferentes, os requisitos dos kits de reagentes de detecção também são diferentes.
figura 1
Figura 1:Diagrama mostrando os principais estágios dos níveis gerais de biomarcadores durante o curso de tempo típico da infecção por COVID-19.O eixo X indica o número de dias de infecção e o eixo Y indica a carga viral, concentração de antígenos e concentração de anticorpos em diferentes períodos.Anticorpo refere-se a anticorpos IgM e IgG.Tanto o RT-PCR quanto a detecção de antígeno são usados para detectar a presença ou ausência do novo coronavírus, que é uma evidência direta para a detecção precoce do paciente.Dentro de uma semana da infecção viral, a detecção por PCR ou detecção de antígeno é preferida.Após a infecção pelo novo coronavírus por cerca de 7 dias, o anticorpo IgM contra o novo coronavírus aumentou gradualmente no sangue do paciente, mas a duração da existência é curta e sua concentração diminui rapidamente.Em contraste, o anticorpo IgG contra o vírus aparece mais tarde, geralmente cerca de 14 dias após a infecção pelo vírus.A concentração de IgG aumenta gradualmente e persiste por um longo período no sangue.Assim, se a IgM for detectada no sangue do paciente, significa que o vírus se infectou recentemente, o que é um marcador de infecção precoce.Quando o anticorpo IgG é detectado no sangue do paciente, significa que a infecção viral já existe há algum tempo.Também é chamada de infecção tardia ou infecção anterior.Muitas vezes é visto em pacientes que estão na fase de recuperação.
Os biomarcadores do novo coronavírus
O novo coronavírus é um vírus de RNA, composto por proteínas e ácidos nucleicos.O vírus invade o corpo do hospedeiro (humano), entra nas células através do receptor ACE2 correspondente ao sítio de ligação e se replica nas células do hospedeiro, fazendo com que o sistema imunológico humano responda a invasores estranhos e produza anticorpos específicos.Portanto, os ácidos nucleicos e antígenos do frasco e anticorpos específicos contra o novo coronavírus podem teoricamente ser usados como biomarcadores específicos para a detecção do novo coronavírus.Para a detecção de ácidos nucleicos, a tecnologia RT-PCR é a mais comumente usada, enquanto os métodos sorológicos são comumente usados para a detecção dos novos anticorpos específicos do coronavírus.Atualmente, há uma variedade de métodos de teste disponíveis que podemos escolher para testar a infecção por COVID-19 [1].
Princípios básicos dos principais métodos de teste para o novo coronavírus
Muitos testes de diagnóstico para COVID_19 estão disponíveis até agora, com mais kits de teste recebendo aprovação sob uma autorização de uso emergencial todos os dias.Embora os novos desenvolvimentos de testes sejam lançados com tantos nomes e formatos diferentes, todos os testes COVID_19 atuais dependem basicamente de duas tecnologias principais: detecção de ácido nucleico para o RNA viral e imunoensaios sorológicos que detectam anticorpos específicos para vírus (IgM e IgG).
01. Detecção de ácido nucleico
Reação em cadeia da polimerase de transcrição reversa (RT-PCR), amplificação isotérmica mediada por loop (LAMP) e sequenciamento de próxima geração (NGS) são os métodos comuns de ácido nucleico para a detecção de novo RNA de coronavírus.O RT-PCR é o primeiro tipo de teste para COVID-19, recomendado pela Organização Mundial da Saúde (OMS) e pelo Centro de Controle e Prevenção de Doenças (CDC) dos EUA.
02. Detecção de anticorpos sorológicos
O anticorpo é uma proteína protetora produzida no corpo humano em resposta à infecção pelo vírus.O IgM é um tipo de anticorpo precoce, enquanto a IgG é um anticorpo de tipo posterior.A amostra de soro ou plasma geralmente é examinada quanto à presença de tipos específicos de IgM e IgG do anticorpo para avaliação das fases aguda e convalescente da infecção por COVID-19.Esses métodos de detecção baseados em anticorpos incluem ensaio de imunocromatografia de ouro coloidal, imunocromatografia de microesferas de látex ou fluorescente, ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) e ensaio de quimioluminescência.
03. Detecção de antígeno viral
O antígeno é uma estrutura do vírus reconhecida pelo corpo humano que aciona o sistema de defesa imunológica para produzir anticorpos para eliminar o vírus do sangue e dos tecidos.Um antígeno viral presente no vírus pode ser direcionado e detectado usando imunoensaio.Assim como o RNA viral, os antígenos virais também estão presentes no trato respiratório de indivíduos infectados e podem ser usados para diagnosticar a fase aguda da infecção por COVID-19.Portanto, muitas vezes é recomendado coletar amostras do trato respiratório superior, como saliva, swabs nasofaríngeos e orofaríngeos, escarro de tosse profunda, líquido de lavagem broncoalveolar (LBA) para teste inicial de antígeno.
Seleção de métodos de teste para o novo coronavírus
A seleção de um método de teste envolve muitos fatores, incluindo ambiente clínico, controle de qualidade de teste, tempo de resposta, custos de teste, métodos de coleta de amostras, requisitos técnicos de pessoal de laboratório, requisitos de instalações e equipamentos.A detecção de ácidos nucleicos ou antígenos virais é fornecer evidência direta da presença dos vírus e confirmar o diagnóstico de infecção por novo coronavírus.Embora existam muitos métodos para detecção de antígenos, sua sensibilidade de detecção do novo coronavírus é teoricamente menor que a da amplificação por RT-PCR.O teste de anticorpos é a detecção de anticorpos antivírus produzidos no corpo humano, que está atrasado no tempo e muitas vezes não pode ser usado para detecção precoce durante a fase aguda da infecção pelo vírus.A configuração clínica para aplicativos de detecção pode variar e os locais de coleta de amostras também podem ser diferentes.Para a detecção de ácidos nucleicos e antígenos virais, a amostra precisa ser coletada no trato respiratório onde o vírus está presente, como swabs nasofaríngeos, swabs orofaríngeos, escarro ou líquido de lavagem broncoalveolar (LBA).Para detecção baseada em anticorpos, a amostra de sangue precisa ser coletada e examinada quanto à presença de anticorpos anti-vírus específicos (IgM/IgG).No entanto, os resultados dos testes de anticorpos e ácidos nucleicos podem se complementar.Por exemplo, quando o resultado do teste é negativo para ácido nucleico, negativo para IgM, mas positivo para IgG, esses resultados indicam que o paciente atualmente não carrega o vírus, mas foi recuperado da nova infecção por coronavírus.[2]
Vantagens e desvantagens dos novos testes de coronavírus
No Protocolo de Diagnóstico e Tratamento para Pneumonia do Novo Coronavírus (versão de teste 7) (lançado pela Comissão Nacional de Saúde e Administração Estatal de Medicina Tradicional Chinesa em 3 de março de 2020), o teste de ácido nucleico é usado como o método padrão ouro para o diagnóstico do novo infecção por coronavírus, enquanto o teste de anticorpos também é considerado um dos métodos de confirmação para o diagnóstico.
Achados patogênicos e sorológicos
(1) Achados patogênicos: O novo ácido nucleico do coronavírus pode ser detectado em esfregaços nasofaríngeos, escarro, secreções do trato respiratório inferior, sangue, fezes e outras amostras usando métodos RT-PCR e/ou NGS.É mais preciso se as amostras forem obtidas do trato respiratório inferior (extração do escarro ou do trato aéreo).As amostras devem ser submetidas ao teste o mais rápido possível após a coleta.
(2) Achados sorológicos: IgM específica do vírus NCP torna-se detectável em torno de 3-5 dias após o início;A IgG atinge uma titulação de pelo menos 4 vezes durante a convalescença em comparação com a fase aguda.
No entanto, a seleção de métodos de teste depende de localizações geográficas, regulamentos médicos e configurações clínicas.Nos EUA, o NIH emitiu as Diretrizes de Tratamento da Doença de Coronavírus 2019 (COVID-19) (Site atualizado: 21 de abril de 2020) e a FDA emitiu a Política de Testes de Diagnóstico para a Doença de Coronavírus-2019 durante a Emergência de Saúde Pública (emitido em 16 de março de 2020 ), em que o teste sorológico dos anticorpos IgM/IgG selecionado apenas como teste de triagem.
Método de Detecção de Ácido Nucleico
O RT_PCR é um teste de ácido nucleico altamente sensível projetado para detectar se o novo RNA do coronavírus está ou não presente na amostra respiratória ou em outra amostra.Um resultado positivo do teste de PCR significa a presença de novo RNA de coronavírus na amostra para confirmar a infecção por COVID-19.Um resultado negativo do teste de PCR não significa a ausência da infecção pelo vírus, pois pode ser afetado pela baixa qualidade da amostra ou ponto de tempo da doença na fase de recuperação, etc.Embora o RT-PCR seja um teste altamente sensível, ele apresenta várias desvantagens.Os testes de RT-PCR podem ser trabalhosos e demorados, dependendo crucialmente da alta qualidade da amostra.Isso pode ser um desafio porque a quantidade de RNA viral não apenas varia tremendamente entre diferentes pacientes, mas também pode variar dentro do mesmo paciente, dependendo dos momentos em que a amostra é coletada, bem como das fases da infecção ou do início dos sintomas clínicos.A detecção do novo coronavírus requer amostras de alta qualidade que contenham uma quantidade suficiente de RNA viral intacto.
O teste RT-PCR pode dar um resultado negativo incorreto (falso negativo) para alguns pacientes que têm infecção por COVID-19.Como sabemos, os principais locais de infecção do novo coronavírus estão localizados no pulmão e no trato respiratório inferior, como alvéolos e brônquios.Portanto, a amostra de escarro de uma tosse profunda ou o líquido de lavagem broncoalveolar (LBA) considerado como tendo a maior sensibilidade para detecção viral.No entanto, na prática clínica, as amostras são frequentemente coletadas do trato respiratório superior usando swabs nasofaríngeos ou orofaríngeos.A coleta dessas amostras não é apenas desconfortável para os pacientes, mas também requer pessoal especialmente treinado.Para tornar a amostragem menos invasiva ou mais fácil, em alguns casos, os pacientes podem receber um swab oral e permitir que eles mesmos coletem uma amostra da mucosa bucal ou da língua.Sem RNA viral suficiente, o RT-qPCR pode retornar um resultado de teste falso-negativo.Na província de Hubei, China, a sensibilidade RT-PCR na detecção inicial foi relatada apenas cerca de 30%-50%, com uma média de 40%.A alta taxa de falso-negativos foi provavelmente causada por amostragem insuficiente.
Além disso, o teste RT-PCR requer pessoal altamente treinado para realizar etapas complexas de extração de RNA e procedimento de amplificação por PCR.Também requer um nível mais alto de proteção de biossegurança, instalações laboratoriais especiais e instrumento de PCR em tempo real.Na China, o teste RT-PCR para detecção de COVID-19 precisa ser realizado em laboratórios de nível de biossegurança 2 (BSL-2), com proteção de pessoal usando a prática do nível de biossegurança 3 (BSL-3).Sob esses requisitos, do início de janeiro ao início de fevereiro de 2020, a capacidade do laboratório CDC da China Wuhan só conseguiu detectar algumas centenas de casos por dia.Normalmente, isso não seria um problema ao testar outras doenças infecciosas.No entanto, ao lidar com uma pandemia global como o COVID-19 com potencialmente milhões de pessoas a serem testadas, o RT-PCR se torna um problema crítico devido aos requisitos de instalações laboratoriais especiais ou equipamentos técnicos.Essas desvantagens podem limitar o uso do RT-PCR como uma ferramenta eficiente de triagem, e também podem levar a atrasos na divulgação dos resultados dos exames.
Método de detecção de anticorpos sorológicos
Com o progresso do curso da doença, especialmente nos estágios médio e tardio, a taxa de detecção de anticorpos é muito alta.Um estudo no Hospital Central Sul de Wuhan mostrou que a taxa de detecção de anticorpos pode chegar a mais de 90% na terceira semana de infecção por COVID-19.Além disso, o anticorpo é o produto da resposta imune humana contra o novo coronavírus.O teste de anticorpos oferece várias vantagens sobre RT-PCR.Em primeiro lugar, os testes sorológicos de anticorpos simples e rápidos.Os testes de fluxo lateral de anticorpos podem ser usados no local de atendimento para fornecer um resultado em 15 minutos.Em segundo lugar, o alvo detectado pelo teste sorológico é o anticorpo, que se sabe ser muito mais estável que o RNA viral.Durante a coleta, transporte, armazenamento e teste, as amostras para testes de anticorpos são geralmente mais estáveis do que as amostras para RT-PCR.Em terceiro lugar, como o anticorpo é distribuído uniformemente na circulação sanguínea, há menos variação de amostragem em comparação com o teste de ácido nucleico.O volume de amostra necessário para o teste de anticorpos é relativamente pequeno.Por exemplo, 10 microlitros de sangue de picada no dedo são suficientes para uso no teste de fluxo lateral de anticorpos.
Em geral, o teste de anticorpos é escolhido como uma ferramenta complementar para detecção de ácido nucleico para melhorar a taxa de detecção do novo coronavírus durante o curso da doença.Quando o teste de anticorpos é usado em conjunto com um teste de ácido nucleico, pode aumentar a precisão do ensaio para o diagnóstico de COVID19, reduzindo possíveis resultados falso-positivos e falso-negativos.O guia de operação atual não recomenda o uso de dois tipos de teste separadamente como um formato de detecção independente, mas deve ser usado como um formato combinado.[2]
Figura 2:A interpretação correta dos resultados dos testes de ácidos nucleicos e anticorpos para a detecção de novas infecções por coronavírus
Figura 3:Liming Bio-Products Co., Ltd. – Novo kit de teste rápido duplo de anticorpos IgM/IgG para coronavírus (StrongStep®Teste rápido de anticorpos SARS-CoV-2 IgM/IgG, imunocromatografia de látex)
Figura 4:Liming Bio-Products Co., Ltd. – StrongStep®Novo kit de PCR em tempo real multiplex de coronavírus (SARS-CoV-2) (detecção de três genes, método de sonda fluorescente).
Observação:Este kit de PCR altamente sensível e pronto para uso está disponível em formato liofilizado (processo de liofilização) para armazenamento de longo prazo.O kit pode ser transportado e armazenado em temperatura ambiente e é estável por um ano.Cada tubo de pré-mistura contém todos os reagentes necessários para a amplificação por PCR, incluindo transcriptase reversa, polimerase Taq, primers, sondas e substratos dNTPs. Os usuários podem simplesmente reconstituir a mistura adicionando água de grau PCR junto com o modelo e depois carregar em um instrumento de PCR para executar a amplificação.
Em resposta ao novo surto de coronavírus, a Liming Bio-Products Co., Ltd. trabalhou rapidamente para desenvolver dois kits de diagnóstico para permitir que laboratórios clínicos e de saúde pública diagnostiquem rapidamente a infecção por COVID-19.Esses kits são muito adequados para uso em triagem em larga escala em países e regiões onde o novo surto de coronavírus está se espalhando rapidamente e para fornecer diagnóstico e confirmação da infecção por COVID-19.Esses kits são para uso somente sob Autorização de Uso de Emergência Pré-notificada (PEUA).Os testes são limitados a laboratórios certificados de acordo com os regulamentos das autoridades nacionais ou locais.
Método de detecção de antígeno
1. A detecção de antígeno viral é classificada na mesma categoria de detecção direta que a detecção de ácido nucleico.Esses métodos de detecção direta procuram evidências de patógenos virais na amostra e podem ser usados para confirmação do diagnóstico.No entanto, o desenvolvimento de kits de detecção de antígenos requer anticorpos monoclonais de alta qualidade com forte afinidade e alta sensibilidade capazes de reconhecer e capturar vírus patogênicos.Geralmente, leva mais de seis meses para selecionar e otimizar um anticorpo monoclonal adequado para uso na preparação do kit de detecção de antígeno.
2. Atualmente, os reagentes para detecção direta do novo coronavírus ainda estão em fase de pesquisa e desenvolvimento.Portanto, nenhum kit de detecção de antígeno foi clinicamente validado e disponível comercialmente.Embora tenha sido relatado anteriormente que uma empresa de diagnóstico em Shenzhen desenvolveu um kit de detecção de antígeno e testado clinicamente na Espanha, a confiabilidade e a precisão do ensaio não puderam ser validadas devido à presença de problemas de qualidade do reagente.Até o momento, o NMPA (antigo FDA da China) ainda não aprovou nenhum kit de detecção de antígeno para uso clínico.Em conclusão, uma variedade de métodos de detecção foram desenvolvidos.Cada método tem suas vantagens e limitações.Os resultados de diferentes métodos podem ser usados para verificação e complementação.
3. A produção de um kit de teste COVID-19 de qualidade depende fortemente da otimização durante a pesquisa e desenvolvimento.Calagem Bio-Product Co.,Ltd.Os kits de teste são necessários para atender aos rigorosos padrões de fabricação e controle de qualidade para garantir que eles forneçam os mais altos níveis de desempenho e consistência.Os cientistas da Liming Bio-Product Co., Ltd. têm mais de vinte anos de experiência em projetar, testar e otimizar kits de diagnóstico in vitro para garantir o mais alto nível de desempenho em quantificação analítica.
Durante a pandemia do COVID-19, o governo chinês enfrentou um aumento da enorme demanda por materiais de prevenção de epidemias nos hotspots internacionais.Em 5 de abril, na coletiva de imprensa do Mecanismo Conjunto de Prevenção e Controle do Conselho de Estado "Fortalecimento da Gestão da Qualidade de Materiais Médicos e Regulação da Ordem do Mercado", Jiang Fan, inspetor de primeiro nível do Departamento de Comércio Exterior do Ministério of Commerce, disse: "Em seguida, concentraremos nossos esforços em dois aspectos, primeiro, para acelerar o suporte de mais suprimentos médicos necessários à comunidade internacional e também para melhorar o controle de qualidade, a regulamentação e o gerenciamento dos produtos. Daremos a contribuição da China para responder conjuntamente à epidemia global e construir uma comunidade com um futuro compartilhado para a humanidade.
Figura 5:O novo reagente de coronavírus da Liming Bio-Products Co., Ltd. obteve o certificado de registro CE da UE
O certificado honorário
Houshenshan
Figura 6. A Liming Bio-Products Co., Ltd. apoiou o Wuhan Vulcan (HouShenShan) Mountain Hospital para lutar contra a epidemia de COVID-19 e recebeu o certificado honorário da Cruz Vermelha de Wuhan.O hospital de montanha Wuhan Vulcan é o hospital mais famoso da China especializado no tratamento de pacientes graves com COVID-19.
À medida que o novo surto de coronavírus continua se espalhando pelo mundo, a Nanjing Liming Bio-Products Co., Ltd. está se esforçando para apoiar e ajudar comunidades em todo o mundo com nossas tecnologias inovadoras para combater essa ameaça global sem precedentes.O teste rápido da infecção por COVID-19 é uma parte crítica para lidar com essa ameaça.Continuamos a contribuir de maneira significativa, fornecendo plataformas de diagnóstico de alta qualidade nas mãos dos profissionais de saúde da linha de frente, para que as pessoas possam receber os resultados críticos dos testes de que precisam.Os esforços da Liming Bio-products Co., Ltd. na batalha contra a pandemia do COVID-19 são contribuir com nossas tecnologias, experiências e conhecimentos para comunidades internacionais para a construção de uma comunidade global de destino.
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Horário da postagem: 01 de maio de 2020
